前 言
食品中糖的测定，通常采用的是氧化还原滴定法，但在同时有其他还原糖存在的情况下，会对测定产生干扰。本标准给出了三种测定方法，其中方法之一高压液相色谱法和方法二酶比色法，避免了还原糖的干扰，而且，具有较高的准确度。方法一可以同时测定各种糖。方法三采用GB/T 16286—1996方法。考虑到传统的氧化还原滴定法在没有其他还原糖干扰的情况下，测定乳糖和蔗糖的准确度较高，而且所需仪器设备简单，多数实验室习惯于采用这种方法，因此，仍将“莱因-埃农氏法”（Lane and Eynor’s Method）作为方法二给出。
本标准方法一为仲裁法。
本系列标准从实施之日起，代替GB 5413—1985。
本标准由中国轻工总会提出。
本标准由全国乳品标准化中心归口。
本标准负责起草单位：国家乳制品质量监督检验中心。
本标准参加起草单位：卫生部食品卫生监督检验所、浙江省轻工业研究所、哈尔滨森永乳品有限公司、雀巢（中国）投资服务有限公司。
本标准主要起草人：王芸、杨金宝、李玉贤、王心祥。
中华人民共和国国家标准
婴幼儿配方食品和乳粉
乳糖、蔗糖和总糖的测定
Milk powder and formula foods for infant and young children
-Determination of lactose,sucrose and total sugars contents
GB/T 5413.5—1997
1 范围
本标准规定了用高压液相色谱法、莱因-埃农氏法和酶-比色法测定糖的方法。
本标准方法一适用于婴幼儿配方食品和乳粉中各种糖的测定；方法二适用于全脂乳粉、全脂加糖乳粉、脱脂乳粉和其他总糖中只含有乳糖、蔗糖的乳粉制品中乳糖、蔗糖和总糖的测定；方法三适用于婴幼儿配方食品和乳粉中蔗糖的测定。
2 引用标准
下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
GB/T 16286—1996 食品中蔗糖的测定方法 酶-比色法
方法一 高压液相色谱法
3 方法提要
婴幼儿食品中如含有多种糖，可利用高压液相色谱法的μ-碳水化合物柱或氨基柱（Lichrosorb-NH2柱），将它们分离，用示差折光检测器，检出各糖液的折光指数，此折光指数与其浓度成正比。
4 试剂
所有试剂，如未注明规格，均指分析纯；所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。
4．1 澄清剂：硫酸铜，质量分数7%。氢氧化钠，质量分数4%。
4．2 乙腈。
4．3 标准溶液
4．3．1 标准糖贮备液，10mg/mL。
精确称取被测糖的标样1g，溶于水中，用水稀释至100mL容量瓶内，定容。
4．3．2 标准糖工作液，4mg/mL。
吸取4mL贮备液，置10mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度。
5 仪器
常用实验室仪器及：
5．1 高压液相色谱仪，带碳水化合物分析柱或氨基柱。
6 操作步骤
6．1 样液制备
精确称取2g左右样品，加30mL水溶解，移至100mL容量瓶中，加澄清剂硫酸铜（4.1）10L，氢氧化钠（4.1）4mL，振摇，加水至刻度，静置半小时，过滤。取4mL样品母液置10mL容量瓶用乙腈定容，通过0.45µ过滤器过滤，滤液备用。
6．2 高压液相色谱仪工作条件：
R401示差折光检测器：
30cm×4.6mm内径——碳水化合物分析柱（夹套保温20℃）
流动相：乙腈/水=85/15
流动相流速：0.5mL/min
6．3 进样
在仪器稳定后，用注射器或进样阀注射50μL标准样液共4次，记下保留时间，测定峰高，放弃第一次数据，取后三者平均峰高值，同样进样50μL四次得出平均峰高。
7 分析结果的表述
样品中糖含量（g/100g）= …………（1）
式中：C‘——标准糖溶液浓度，mg/mL；
H——样品中糖的平均峰高；
H‘——标准糖溶液的峰高；
m——样品的质量，g。
注：如果需同时测定样品中所含其他糖类，可在标准糖溶液中加入各种糖1g，进样如前，记下各种糖保留时间，按上列公式计算各值。
8 允许差
同一样品两次测定值之差不得超过两次测定平均值的5%。
方法二 乳糖、蔗糖和总糖的测定（莱因-埃农氏法）
9 方法提要
乳糖：样品经除去蛋白质以后，在加热条件下，直接滴定已标定过的费林氏液，样液中的乳糖将费林氏液中的二价铜还原为氧化亚铜。以次甲基蓝为指示剂，以终点稍过量时，乳糖将蓝色的氧化型次甲基蓝还原为无色的还原型次甲基蓝。根据样液消耗的体积，计算乳糖含量。
蔗糖：样品除去蛋白质后，其中蔗糖经盐酸水解转化为具有还原能力的葡萄糖和果糖，再按还原糖测定。将水解前后转化糖的差值乘以相应的系数即为蔗糖含量。
总糖：乳糖和蔗糖之和。
10 试剂
所有试剂，如未注明规格，均指分析纯；所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。
10．1 费林氏液（甲液和乙液）
10．1．1 甲液：取34.639g硫酸铜，溶于水中，加入0.5mL浓硫酸，加水至500mL。
10．1．2 乙液：取173g酒石酸钾钠及50g氢氧化钠溶解于水中，稀释至500mL，静置两天后过滤。
10．2 次甲基蓝溶液：10g/L。
10．3 盐酸溶液：体积比1：1。
10．4 酚酞溶液：0.5g酚酞溶液于75mL体积分数为95%的乙醇中，并加入20mL水，然后再加入约0.1mol/L的氢氧化钠溶液，直到加入一滴立即变成粉红色，再加入水定容至100mL。
10．5 氢氧化钠溶液：c（NaOH）为300g/L。取300g氢氧化钠，溶于1000mL水中。
10．6 乙酸铅溶液：c（PbAc2）为200g/L。取20g乙酸铅，溶解于100mL水中。
10．7 草酸钾-磷酸氢二钠溶液：取草酸钾3g，磷酸氢二钠7g，溶解于100mL水中。
11 仪器
常用理化实验室仪器。
12 操作步骤及结果计算
12．1 费林氏液的标定
12．1．1 用乳糖标定
12．1．1．1 称取预先在92～94℃烘箱中干燥2h，乳糖标样约0.75g（准确至0.2mg），用水溶解并稀释至250mL。将此乳糖溶液注入一个50mL滴定管中，待滴定。
12．1．1．2 预滴定：取10mL费林氏液（甲、乙液各5mL）于250mL三角烧瓶中。再加入20mL蒸馏水，从滴定管中放出15mL乳糖溶液于三角瓶中，置于电炉上加热，使其在2min内沸腾，沸腾后关小火焰，保持沸腾状态15s，加入3滴次甲基蓝溶液（10.2），继续滴入乳糖溶液至蓝色完全褪尽为止，读取所用乳糖的毫升数。
12．1．1．3 精确滴定：另取10mL费林氏液（甲、乙液各5mL）于250mL三角烧瓶中，再加入20mL蒸馏水，一次加入比预备滴定量少0.5～1.0mL的乳糖溶液，置于电炉上，使其在2min内沸腾，沸腾后关小火焰，维持沸腾状态2min，加入3滴次甲基蓝溶液，然后继续滴入乳糖溶液（一滴一滴徐徐滴入），待蓝色完全褪尽即为终点。以此滴定量作为计算的依据（在同时测定蔗糖时，此即为转化前滴定量）。
12．1．1．4 按式（2）、（3）计算乳糖测定时，费林氏液的乳糖校正值（f1）:
………………………………（2）
……………………………………………（3）
式中：A1——实测乳糖数，mg；
V1——滴定时消耗乳糖液量，mL；
m1——称取乳糖的质量，g；
AL1——由乳糖液滴定毫升数查表1所得的乳糖数，mg。
表1 乳糖及转化糖因数表（10mL费林氏液）
|
滴定量，mL
|
乳糖，mg
|
转化糖，mg
|
滴定量，mL
|
乳糖，mg
|
转化糖mg
|
|
15
|
68.3
|
50.5
|
33
|
67.8
|
51.7
|
|
16
|
68.2
|
50.6
|
34
|
67.9
|
51.7
|
|
17
|
68.2
|
50.7
|
35
|
67.9
|
51.8
|
|
18
|
68.1
|
50.8
|
36
|
67.9
|
51.8
|
|
19
|
68.1
|
50.8
|
37
|
67.9
|
51.9
|
|
20
|
68.0
|
50.9
|
38
|
67.9
|
51.9
|
|
21
|
68.0
|
51.0
|
39
|
67.9
|
52.0
|
|
22
|
68.0
|
51.0
|
40
|
67.9
|
52.0
|
|
23
|
67.9
|
51.1
|
41
|
68.0
|
52.1
|
|
24
|
67.9
|
51.2
|
42
|
68.0
|
52.1
|
|
25
|
67.9
|
51.2
|
43
|
68.0
|
52.2
|
|
26
|
67.9
|
51.3
|
44
|
68.0
|
52.2
|
|
27
|
67.8
|
51.4
|
45
|
68.1
|
52.3
|
|
28
|
67.8
|
51.4
|
46
|
68.1
|
52.3
|
|
29
|
67.8
|
51.5
|
47
|
68.2
|
52.4
|
|
30
|
67.8
|
51.5
|
48
|
68.2
|
52.4
|
|
31
|
67.8
|
51.6
|
49
|
68.2
|
52.5
|
|
32
|
67.8
|
51.6
|
50
|
68.3
|
52.5
|
|
注：“因数”系指与滴定量相对应的数目，可自表1中查得。若蔗糖含量与乳糖含量的比超过3：1时，则在滴定量中加表2中的校正后计算。
|
12．1．2 用蔗糖标定
12．1．2．1 称取在105℃烘箱中干燥2h的蔗糖约0.2g（准确到0.2mg），用50mL水溶解并洗入100mL容量瓶中，加水10mL，再加入10mL盐酸（10.3），置75℃水浴锅中，时时摇动，在2min30s至2min45s之间，使瓶内温度升至67℃。自达到67℃后继续在水浴中保持5min，于此时间内使其温度升至69.5℃，取出，用冷水冷却，当瓶内温度冷却至35℃时，加2滴甲基红指示剂（10.4），用300g/L的氢氧化钠（10.5）中和至呈中性。冷却至20℃，用水稀释至刻度，摇匀。并在此温度下保温30min后再按12.1.1.2和12.1.1.3操作。得出滴定10mL费林氏液所消耗的转化糖量。
12．1．2．2 按式（4）、（5）计算蔗糖测定时，费林氏液的蔗糖校正值（f2）：
………………………………（4）
……………………………………………（5）
式中：A2——实测转化糖数，mg；
V2——滴定时消耗蔗糖液量，mL；
m2——称取蔗糖的质量，g；
AL2——由蔗糖液滴定毫升数查表1所得的转化糖数，mg。
12．2 乳糖的测定
12．2．1 样品处理
12．2．1．1 称取2.5～3g样品（准确至0.01g），用100mL水分数次溶解并洗入250mL容量瓶中。
12．2．1．2 加4mL乙酸铅（10.6）、4mL草酸钾-磷酸氢二钠溶液，每次加入试剂时都要徐徐加入，并摇动容量瓶，用水稀释至刻度。静止数分钟，用干燥滤过滤，弃去最初25mL滤液后，所得滤液作滴定用。
12．2．2 滴定
12．2．2．1 预滴定：将此滤液注入一个50mL滴定管中，待测定。取10mL费林氏液（甲、乙液各5mL）于250mL三角烧瓶中，再加入20mL蒸馏水，置于电炉上加热，使其在2min内沸腾，沸腾后关小火焰，保持沸腾状态15s，加入3滴次甲基蓝（10.2），然后徐徐滴入乳糖溶液至蓝色完全褪尽为止，读取所用乳糖的毫升数。
12．2．2．2 精确滴定：另取10mL费林氏液（甲、乙各5mL）于250mL三角烧瓶中，再加入20mL蒸馏水，一次加入比预备0.5～1.0mL的乳糖溶液，置于电炉上，使其在2min内沸腾，沸腾后关小火焰，维持沸腾状态2min，加入3滴次甲基蓝溶液，然后一滴一滴徐徐滴入乳糖溶液，待蓝色完全褪尽即为终点。以此滴定量作为计算的依据（在同时测定蔗糖时，此即为转化后滴定量）。
12．2．3 乳糖含量的计算
………………………………………………（6）
式中：L——样品中乳糖的质量分数，g/100g；
F1——由消耗样液的毫升数查表1所得乳糖数，mg；
f1——费林氏液乳糖校正值；
V1——滴定消耗滤液量，mL；
m——样品的质量，g。
12．3 蔗糖的测定
12．3．1 转化前转化糖量的计算
利用测定乳糖时的滴定时，自表1中查出相对应的转化糖量，按式（7）计算：
转化前转化糖质量分数（%）= ……………………（7）
式中：F2——由测定乳糖时消耗样液的毫升数查表1所得乳糖数，mg；
f2——费林氏液蔗糖校正值；
V1——滴定消耗滤液量，mL；
m——样品的质量，g。
12．3．2 样液的转化及滴定
取50mL样液于100mL容量瓶中，加水10mL，再加入10mL的盐酸（10.3），置75℃水浴锅中，时时摇动，在2min30s至2min45s之间，使瓶内温度升至67℃。自达至67℃后继续在水浴中保持5min，于此时间内使其温度升至69.5℃，取出，用冷水冷却，当瓶内温度冷却至35℃时，加2滴酚酞溶液剂（10.4），用氢氧化钠（10.5）中和至呈中性，冷却至20℃，用水稀释至刻度，摇匀。并在此温度下保温30min后再按12.2.2滴定，得出滴定10mL费林氏液所消耗的转化液量。
转化后转化糖质量分数（%）= ………………（8）
式中：F3——由V查得转化糖数，mg；
f2——费林氏液蔗糖校正值；
m——样品的质量，g；
V1——滴定消耗转化液量，mL。
12．3．3 蔗糖含量的计算
样品中蔗糖含量（g/100g）= ……………………（9）
式中：L1——转化后转化糖的质量分数，%；
L2——转化前转化糖的质量分数，%。
12．3．4 若样品中乳糖与蔗糖之比超过3：1时，则计算乳糖时应在滴定量中加上表2中的校正值数后再查表1和计算。
12．3．5 总糖=蔗糖+乳糖
13 允许差
13．1 重复性
由同一分析人员在短时间间隔内测定的两个结果之间的差值，不应超过结果平均值的1.5%。
13．2 重现性
由不同实验室的两个分析人员对同一样品测得的两个结果之差，不应超过结果平均值的2.5%。
表2 乳糖滴定量校正值数
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滴定终点时所用的糖液量
mL
|
用10mL费林氏液、蔗糖及乳糖量的比
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3：1
|
6：1
|
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15
|
0.15
|
0.30
|
|
20
|
0.25
|
0.50
|
|
25
|
0.30
|
0.60
|
|
30
|
0.35
|
0.70
|
|
35
|
0.40
|
0.80
|
|
40
|
0.45
|
0.90
|
|
45
|
0.50
|
0.95
|
|
50
|
0.55
|
1.05
|
方法三 蔗糖的测定——（酶比色法）
同GB/T 16286。